
圖1:TaqMan動作示意圖
Ct值計算及含義
由於 DNA 構成半保留複製,因此目標模板的反應被放大至 2 的 N 次方。病毒的每一次復制構成一個週期; “Ct值”是循環閾值的縮寫。當進行 qPCR 反應時,患者樣本中的目標核酸模板繼續以 2 的 2 次方的速率擴增(圖 2)。同時,用特異的TaqMan探針檢測病毒的特異基因片段。當核酸擴增超過設定的閾值/截止值時,可以進行檢測。此時的Ct值代表病毒已復制的次數。例如,當 Ct 值為 25 時,這意味著它已經經歷了 25 個循環,進而表明病毒在檢測之前已擴增了 2 的 25 次方。因此,當某天患者體內的病毒量較高時,需要進行的複制次數較少,Ct值也較低,反之亦然。
由於 DNA 構成半保留複製,因此目標模板的反應被放大至 2 的 N 次方。病毒的每一次復制構成一個週期; “Ct值”是循環閾值的縮寫。當進行 qPCR 反應時,患者樣本中的目標核酸模板繼續以 2 的 2 次方的速率擴增(圖 2)。同時,用特異的TaqMan探針檢測病毒的特異基因片段。當核酸擴增超過設定的閾值/截止值時,可以進行檢測。此時的Ct值代表病毒已復制的次數。例如,當 Ct 值為 25 時,這意味著它已經經歷了 25 個循環,進而表明病毒在檢測之前已擴增了 2 的 25 次方。因此,當某天患者體內的病毒量較高時,需要進行的複制次數較少,Ct值也較低,反之亦然。

圖2:Ct值計算圖(Ct=n;RFU=2n)
通常,qPCR 反應運行 40-45 個循環,但 Ct 值需要多少週期才能被視為陽性? 它取決於試劑的檢測限 (LoD) 和閾值/截止值。
GB SARS-CoV-2 Real-Time RT-PCR kit(4PCO052E)的Ct閾值為37,檢測限(LoD)為1,000 copies/ml,代表患者體內病毒載量極低。該病毒需要擴增 2 的 37 次方(Ct = n,病毒拷貝數 = 2n)才能使用 GB SARS-CoV-2 反轉錄即時聚合酶鏈鎖反應試劑盒進行檢測。通過了解Ct值背後的原理,我們可以獲得更多信息,比如推測與疾病的嚴重程度、死亡率、傳染性等。大多數人可能直觀地認為患者的Ct值越低,病毒載量就越高; 而且症狀的嚴重程度和傳染性也相對較高。但實際上,這種現像在臨床上並不是絕對的。這是因為Ct值並不是一個絕對值,它會受到採樣方法、樣本類型、試劑質量、採樣時間等多種因素的影響。
Ct值當然是一個重要的依據; 在當前的 COVID-19 醫療決策中。但Ct值只是確診患者陽性時參考的指標之一。醫生仍會使用患者的症狀作為決策的主要依據。
除了參考試劑本身的檢測限外,隨著每日確診病例數的上升,世界各國政府也在放寬Ct值檢疫標準。與解除隔離相關的Ct值越高,則越嚴格;這種做法比較適合確診病例數量較少、需要防止病毒傳播的情況。但當感染人數過多、醫療資源消耗過多時,就必須考慮為重症患者保留足夠的醫療資源,平衡防疫及經濟活動。
GB SARS-CoV-2 Real-Time RT-PCR kit(4PCO052E)的Ct閾值為37,檢測限(LoD)為1,000 copies/ml,代表患者體內病毒載量極低。該病毒需要擴增 2 的 37 次方(Ct = n,病毒拷貝數 = 2n)才能使用 GB SARS-CoV-2 反轉錄即時聚合酶鏈鎖反應試劑盒進行檢測。通過了解Ct值背後的原理,我們可以獲得更多信息,比如推測與疾病的嚴重程度、死亡率、傳染性等。大多數人可能直觀地認為患者的Ct值越低,病毒載量就越高; 而且症狀的嚴重程度和傳染性也相對較高。但實際上,這種現像在臨床上並不是絕對的。這是因為Ct值並不是一個絕對值,它會受到採樣方法、樣本類型、試劑質量、採樣時間等多種因素的影響。
Ct值當然是一個重要的依據; 在當前的 COVID-19 醫療決策中。但Ct值只是確診患者陽性時參考的指標之一。醫生仍會使用患者的症狀作為決策的主要依據。
除了參考試劑本身的檢測限外,隨著每日確診病例數的上升,世界各國政府也在放寬Ct值檢疫標準。與解除隔離相關的Ct值越高,則越嚴格;這種做法比較適合確診病例數量較少、需要防止病毒傳播的情況。但當感染人數過多、醫療資源消耗過多時,就必須考慮為重症患者保留足夠的醫療資源,平衡防疫及經濟活動。